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                技术支持刺激性测试
                眼刺激试验是化妆品安全评价的主要测试√项目,化妆品引起的局部眼刺激通常包括结膜、角 膜、虹膜和泪腺的作用, 基于体内眼刺激※作用发生的机制,目前已开发了多★种替代方法。因此,广曼根据角膜损伤的发生机制,结合体外方法的原理和标准化应用程度,根据■客户不同需求,为客户提供最专业的眼刺激试验方案。
                一.鸡胚绒毛膜尿囊膜实验(HET-CAM)
                1.实验目的
                测试受试物引起鸡胚绒毛尿◎囊膜毒性变化的能力,从而客观评估物质潜在的眼刺激性程度。
                2.实验原理
                鸡胚绒毛尿囊膜试验是一种较早被采用的眼刺激性体外评估方法,是利用鸡胚绒毛膜尿囊膜结构与人结膜相似的特点开发的替代方法。绒毛尿囊膜(CAM)是一个呼吸⊙性膜,包围在鸡胚周围。本试验利用孵化的鸡胚中期绒毛尿囊膜血管系统完整、清晰和透明的特点,将受试物直接接触CAM膜,于5 min之◥后观察绒毛尿囊膜毒性效应指标(主要为:出血、凝血 和血管融解)的变化,这些指标反映血管及血管网的形态结构、颜色和通透性的变化,以及反映绒毛尿囊膜蛋白质变性等现象及其受损程度,然后组合得到一个评分,用于评估受试物的眼刺激性。
                3.评分标准
                表 8-4 HET-CAM 评分表
                分值 0分 1分 2分 3分
                出血 无出血 轻度出血:仅见细小血管出血和少量出血(如0.5% TexaponASV,作用5min) 中度出血:小血管和大血管出血,并有明显的血液流出(如1.0% TexaponASV,作用5min) 重度出血:几乎所有血管都出血,大量血液流出(如5% TexaponASV,作用5min)
                凝血 无凝血 轻度凝血:血管内 和/或 血管外轻度凝血,和/或 CAM膜轻№度混浊(轻度凝血如0.2% NaOH 溶液作用 5min,轻度混浊如0.3% 乙酸作用5min) 中度凝血:血管内 和/或 血管外中度凝血,和/或 CAM膜中ξ度混浊(中度凝血如0.3% NaOH 溶液作用5min,中度混浊如3% 乙酸作用5min) 重度凝血:血管内 和/或 血管外重度凝血,和/或 CAM膜重度混浊ξ (重度凝血如0.5% NaOH 溶液作用5min,重度混浊如30% 乙酸作用5min)
                血管融解 无血管融解 轻度血管融解:仅小血管融解(如0.5% TexaponASV,作用5min) 中度血管融解:小血管和大血管融解(如 1% TexaponASV,作用5min) 重度血管融解:大血管和全部血束都融解(如 5% TexaponASV,作用5min)
                4.评分附图
                • a*血管清晰可见,血管正常。
                • b*血管出血。
                • c*血管融解。
                • d*血管凝血。
                • e*血管重度融解,CAM膜浑浊。
                 
                5.刺激性评价
                表1. 刺激评分结果评价
                刺激评分IS 预测分类 Prediction classification
                IS<1 无刺激性 Non-irritant(NI)
                1≤IS<5 轻度无刺激性Slightly irritant(SI)
                5≤IS<9 中度无刺激性 Moderately irritant(MI)
                IS≥10 强刺激性/腐蚀性 Strong irritant/Corrosive(Co)
                终点评分法(ES):每只鸡胚记分=每只鸡胚观察到的出血、凝血和血管融解程度的和;
                终点评分(ES)=6 只鸡胚得分〒的数总和。
                表2.终点评分法结果→评价
                刺激性分类 无/轻刺激性 中度刺激性 强度刺激/腐蚀性
                终点评分 ES≤12 12<ES<16 ES≥16
                二:绒毛膜尿囊∏膜血管试验(chorioallantoic membrane vascular assay.CAMVA)
                是简化了的 HET-CAM方法,只观察受试物暴露CAM 30 min后血管的变化(出血、血管溶↙解和凝血),计算使50% 的鸡胚出现上述损伤的受试物浓度。CAMVA法适 用于轻度到中度眼刺激性化合物的检测,也可∏正确区分刺激物和非刺激物。
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