一、实验目的
模拟化妆品生产、储存和消费者使用过程中可能存在的微≡生物污染（一次污染和二次污染），人为的在产品中加︼入定量的已知菌种，定期跟踪检测产品中微生物的消长情况，来评判防腐剂的防腐效果的实验，从而最》大程度保证化妆品中中微生物含量达标。
《化妆品安全技术规范》2015 版的微生物指▃标
| 微生物指标 |
限值 |
备注 |
| 菌落总数（CFU/g 或 CFU/mL） |
≤500 |
眼部化妆品、口唇化妆品和儿童化妆品 |
| ≤1000 |
其他化妆╱品 |
| 霉菌↓和酵母菌总数（CFU/g 或 CFU/mL） |
≤100 |
- |
| 耐热大肠杆菌/g（或 mL） |
不得检出 |
- |
| 金黄色』葡萄球菌/g（或 mL） |
不得检出 |
- |
| 铜绿假单胞菌/g（或 mL） |
不得检出 |
- |
二、菌种选择
同微生物限度实验。
三、实验方法
-
方法1一次加菌》法
称取一定『量的受试样品，按1:x的比例加入混合◣菌悬液，要求样品中的细菌初始加菌浓度达到105*106 cfu/g；酵〓母和霉菌初始加菌浓度达到105*106 cfu/g以及︽不同浓度梯度抑菌剂。将样品与菌液充分混合均匀，用封口胶封好样品瓶口，置于25℃的培养箱中〓保存。在接菌后的第7、14、21和28天取样检测微生物含量。
-
方法2 三次加菌▲法
称取一定量的受试样品，按1：x的比例加入混合菌悬液，要求样品中的细菌初始加菌浓度达到106*107 cfu/g ；酵母和霉菌初始加菌浓度达到105*106 cfu/g 。将样品与菌↑液充分混合均匀后，用封口胶封好样品瓶口，置于25℃的培〒养箱中培养。接下来每14天加菌一次一共加3次菌，每次加菌→浓度均需达到要求。从第一Ψ 次加菌后的每七天取样做微生物含量检测，即采样分析第卐7、14、21、28、35、42天中样品的含菌量。其中，第14天检测后进行第二次加菌㊣ ，第28天检测后进行第◆三次加菌。
四、评价标准
CTFA标准
美国化妆〖品↙、洗涤剂和香精协会（CTFA)推荐的菌种，是极具代⌒表性的，按CTFA标准做微生物挑战试验通过，全世界公认3年保质期。
| 第一次加菌 |
细菌 |
细菌：7天内细菌的㊣ 数量降低99.9%以上，14天内细菌的数量< 10，28天时未检出。 |
| 霉菌和酵母菌 |
霉菌和酵母菌总数培养7天时数量减少90%，不再增加，通过测试。 |
| 第三次加∞菌 |
防腐效果优①良 |
即三次加菌后，在每次加Ψ菌后的第14天时，存活菌量减☉少99.9%，通过测试。 |
| 防腐效果尚可 |
即三次加菌后，在每次加菌后的第14天时，存活菌量减少90%以上，通过测试。 |
| 防腐效∴果差 |
即三次加菌后，在每次加菌后的第14天时，存活菌量减少〖低于起始浓度的90%,不通过测试。 |
五、参考标准
到目前为止, 世界∩各国及其有关组织对化妆品防腐体系∑ 的评价还未有一个统一的方法, 但其基本设计则是相同的,其中美国药典( USP)法及美国化妆☆品、香精和洗涤剂协会( CTFA) 法是较具代表性的两种方法。
我司参考ζ标准：
美国药典USP 39（51）
美国化妆品、香精和洗涤剂协会( CTFA)
欧标EP 7.0-5.1.3
